Enterotoxigenic profiles and submerged and interface biofilms in Bacillus cereus group isolates from foods / Perfiles enterotoxigénicos y biopelículas de superficie y sumergidas en aislados del grupo Bacillus cereus de alimentos

Abstract Biofilm formation by Bacillus cereus strains is now recognized as a systematic contaminaron mechanism in foods; the aim of this study was to evaluate the production of submerged and interface biofilms in strains of B. cereus group in different materials, the effect of dex-trose, motility, the presence of genes related to biofilms and the enterotoxigenic profile of the strains. We determine biofilm production by safranin assay, motility on semi-solid medium, toxin gene profiling and genes related to biofilm production by PCR in B. cereus group iso-lated from food. In this study, we observe strains used a higher production of biofilms in PVC; in the BHI broth, no submerged biofilms were found compared to phenol red broth and phenol red broth supplemented with dextrose; no strains with the ces gene were found, the enterotoxin profile was the most common the profile that includes genes for the three enterotoxins. We observed a different distribution of tasA and sipW with the origin of isolation of the strain, being more frequent in the strains isolated from eggshell. The production and type of biofilms are differential according to the type of material and culture medium used.

Resumen La formación de biopelículas por cepas de Bacillus cereus es reconocida como un mecanismo de contaminación sistemática en alimentos; el objetivo del estudio fue evaluar la producción de biopelículas sumergidas y de superficie en cepas del grupo de Bacillus cereus en diferentes materiales, el efecto de la dextrosa, la motilidad, la presencia de genes relacionados a biopelículas y el perfil enterotoxigénico de las cepas. Determinamos la producción de biopelículas por el ensayo de safranina, motilidad en medio sólido, perfil enterotoxigénico y genes relacionados a producción de biopelículas por PCR en aislados del grupo de Bacillus cereus de alimentos. En este estudio, observamos en las cepas utilizadas una alta producción de biopelículas en PVC; en caldo BHI, no se encontraron biopelículas sumergidas en comparación con el caldo rojo de fenol y caldo rojo de fenol suplementando con dextrosa; no se encontraron cepas con el gen ces, el perfil de enterotoxinas más común fue el perfil que incluía los genes de las tres enterotoxinas, también observamos una distribución diferente de tasA y sipW con relación al origen de la cepa, siendo más frecuente estos genes en las cepas aisladas de huevos. La producción y el tipo de biopelículas es diferente de acuerdo con el tipo de material y el medio de cultivo utilizado.

Enterotoxigenic profiles and submerged and interface biofilms in Bacillus cereus group isolates from foods.

Biofilm formation by Bacillus cereus strains is now recognized as a systematic contamination mechanism in foods; the aim of this study was to evaluate the production of submerged and interface biofilms in strains of B. cereus group in different materials, the effect of dextrose, motility, the presence of genes related to biofilms and the enterotoxigenic profile of the strains. We determine biofilm production by safranin assay, motility on semi-solid medium, toxin gene profiling and genes related to biofilm production by PCR in B. cereus group isolated from food. In this study, we observe strains used a higher production of biofilms in PVC; in the BHI broth, no submerged biofilms were found compared to phenol red broth and phenol red broth supplemented with dextrose; no strains with the ces gene were found, the enterotoxin profile was the most common the profile that includes genes for the three enterotoxins. We observed a different distribution of tasA and sipW with the origin of isolation of the strain, being more frequent in the strains isolated from eggshell. The production and type of biofilms are differential according to the type of material and culture medium used.

Virulence, biofilm formation ability and antimicrobial resistance of staphylococcus aureus isolated from cell phones of university students / Virulência, capacidade de formação de biofilme e resistência antimicrobiana de staphylococcus aureus isolado de telefones celulares de estudantes universitários

INTRODUCTION: Contamination of cell phones can contribute to the dissemination of pathogens in the community and/or hospital environment. OBJECTIVE: To characterize Staphylococcus aureus strains isolated from cell phones of university students. METHODS: Samples were collected from 100 cell phones. Detection of genes associated with virulence factors such as biofilm formation (icaA and icaD), enterotoxins production (SEA, SEB, SEC, and SED), and resistance to methicillin (mecA and mecC) was performed in S. aureus isolates by PCR. Typing mecA gene performed by multiplex PCR. Susceptibility to antimicrobials and biofilm formation rate also evaluated by using disk diffusion test and crystal violet staining. RESULTS: S. aureus was present in 40% of the total samples and about 70% of them belonged to Nursing students. Of the isolates, 85% presented resistance to penicillin and 50% were classified as moderate biofilm producers. In addition, 92.5% of isolates contained the gene icaA and 60% of the gene icaD. Approximately 25% of the isolates presented the mecA gene. Typing of the mecA gene showed the presence of staphylococcal chromosome cassette SCCmec I and c III respectively in 20% and 10% of the isolates. 70% of the samples could not be typed by the technique. Regarding the enterotoxins, the most prevalent gene was SEA (30%) followed by the SEC gene (2.5%). The presence of SED and SEB genes not observed in any of the isolates. CONCLUSION: The cleaning and periodic disinfection of cell phones can contribute to the reduction of the risk of nosocomial infection.

INTRODUÇÃO: A contaminação de celulares pode contribuir para a disseminação de patógenos na comunidade e/ou ambiente hospitalar. OBJETIVO: Caracterizar cepas de Staphylococcus aureus de telefones celulares de estudantes universitários. MÉTODOS: Foram coletadas amostras de 100 telefones celulares. Detecção de genes associados a fatores de virulência quanto a: formação de biofilme (icaA e icaD), produção de enterotoxinas (SEA, SEB, SEC e SED) e resistência à meticilina (mecA e mecC) foi realizada em isolados de S. aureus por PCR. A Tipagem do gene mecA foi realizada por PCR multiplex. A susceptibilidade a antimicrobianos e a taxa de formação de biofilme pelo teste de difusão em disco e coloração com cristal violeta. RESULTADOS: S. aureus esteve presente em 40% do total de amostras, destas, 70% pertenciam a estudantes do curso de enfermagem. Dos isolados, 85% apresentaram resistência à penicilina e 50% foram classificados com moderada formação de biofilme. Além disso, 92,5% dos isolados continham o gene icaA e 60% o gene icaD. Aproximadamente 25% dos isolados apresentaram o gene mecA. A tipagem do gene mecA mostrou a presença do cassete cromossômico estafilocócico SSCmec I e III em respectivamente 20% e 10% dos isolados. 70% das amostras não puderam ser identificadas pela técnica. Das enterotoxinas, o gene mais prevalente foi o SEA (30%), seguido pelo gene SEC (2.5%). A presença dos genes SED e SEB não foi observada nos isolados. CONCLUSÃO: A limpeza e desinfecção periódica dos telefones celulares podem contribuir para a redução do risco de infecção nosocomiais.

Brote de intoxicación alimentaria en un jardín de infantes de la provincia de Buenos Aires / Food poisoning outbreak in a kindergarten in the Province of Buenos Aires, Argentina

Resumen El 27 de noviembre de 2008 ocurrió un brote de intoxicación alimentaria asociado al consumo de salpicón de ave en un jardín de infantes de Hurlingham, provincia de Buenos Aires. Treinta y siete niños y 10 adultos presentaron síntomas gastrointestinales. Cinco niños fueron internados con signos de deshidratación, y uno de ellos requirió cuidados intensivos. Se aisló Staphylococcus aureus subsp. aureus del alimento involucrado, de 4/5 muestras de materia fecal de pacientes y de 3/5 manipuladores (nariz del manipulador 1, manos de manipuladores 2 y 3). Las cepas aisladas portaban los genes que codifican las enterotoxinas SEA y SED. Por electroforesis de campo pulsado con la enzima SmaI, los patrones de macrorrestricción presentaron 100% de similitud. La investigación oportuna del brote permitió identificar al agente causal de la intoxicación, determinar las fallas en la elaboración del alimento e implementar las medidas correctivas correspondientes.

Abstract On November 27, 2008, a foodborne disease outbreak associated with the consumption of chicken salad occurred in a kindergarten in the District of Hurlingham, Province of Buenos Aires. Thirty-seven children and 10 adults with gastrointestinal symptoms were affected. Five children were hospitalized with signs of dehydration, one of them requiring intensive care. Staphylococcus aureus subsp. aureus was isolated from the mentioned food in 4 out of 5 stool specimens from the patients, and in 3 out of 5 food handlers (nose of food handler #1, hands of food handlers #2 and 3). The isolates carried the genes coding for enterotoxins SEA and SED. The macrorestriction patterns showed 100% similarity by pulsed-field gel electrophoresis using the SmaI enzyme. A timely outbreak investigation allowed us to identify the causative agent of the food poisoning as well as the failures in food processing and to implement corrective measures.

Bacterial identification, somatic cell count, antimicrobial profile and toxigenic Staphylococcus strains search from mastitic cow milk samples on small farms properties / Identificação bacteriana, contagem de células somáticas, perfil antimicrobiano e pesquisa de linhagens toxigênicas de Staphylococcus em amostras de leite bovino de pequenas propriedades rurais

Bovine mastitis has a negative impact on milk production and can pose risks to public health. The present study aimed to evaluate the quality of bovine milk from small farms in the Botucatu/SP region. Somatic cell counts (SCC), identification of pathogens involved in mastitis, and sensitivity antimicrobial profile of staphylococci isolated were performed. The presence of enterotoxin encoding genes in isolates of staphylococci obtained from milk was investigated. Milk samples from individual mammary quarters of cows were submitted to the California mastitis test (CMT) and SCC. Of the 239 dairy cows from 21 dairy herds evaluated (mean = 11.4 animals/property), two cows (0.8%) presented clinical mastitis and 86 (35.9%) subclinical mastitis. Bacterial culture was performed in 177 quarter milk samples. Staphylococci were identified in 55 (31.1%), corynebacteria in 45 (25.4%), streptococci in 25 (14.1%) and coliforms in four (2.3%) milk samples. Average SCC from culture-positive samples was 1598x103 cells/mL, in case of staphylococci was 1362x103 cells/ml, streptococci was 2857x103 cells/mL, corynebacteria was 976x103 cells/mL and in the cases of coliforms 1161x103 cells/mL were obtained. Staphylococci showed a high sensitivity (>95%) to cephalothin, cotrimoxazole, enrofloxacin, and gentamicin, with a 41.2% resistance to penicillin and 11.8% to oxacillin. Both coagulase positive (CPS) and negative staphylococci (CNS) carried genes encoding enterotoxins in 21.6% of the first group and 41.9% in the second. The sea gene was the most detected 45.8% (n=24) between them, followed by seb with 29.2% and sec with 25.0%. The sed gene was not identified. We highlight the potential risk to public health in the possibility of strains of Staphylococcus spp. enterotoxin-producing genes that can cause staphylococcal food poisoning.(AU)

A mastite bovina impacta negativamente a produção leiteira e pode acarretar riscos à saúde pública. O presente estudo teve como objetivo a avaliação da qualidade do leite bovino proveniente de pequenas propriedades na região de Botucatu/SP. Foi realizada a contagem de células somáticas (CCS), identificação dos patógenos envolvidos nas mastites, e realizado o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos dos estafilococos isolados. Pesquisou-se a presença de genes codificadores de enterotoxinas em isolados de estafilococos obtidos a partir do leite mastítico. Amostras de leite de quartos mamários individuais de vacas foram submetidas ao "California mastitis test" (CMT) e à CCS. Das 239 vacas em lactação provenientes de 21 rebanhos leiteiros avaliados (média = 11,4 animais/propriedade), dois (0,8%) animais apresentaram mastite clínica e, 86 (35,9%) mastite subclínica. 177 amostras de leite foram cultivadas em ágar sangue bovino 5% e ágar MacConckey e obteve-se 55 (31,1%) Staphylococcus spp., 25 (14,1%) Streptococcus spp., 45 (25,4%) Corynebacterium spp. e quatro (2,3%) coliformes. A média da CCS das amostras procedentes de todos os quartos mamários infectados avaliados foi de 1598x103 células/mL, enquanto que nos casos que foram isolados Staphylococcus spp. foi de 1362x103 células/mL, Streptococcus spp. 2857x103 células/mL, Corynebacterium spp. de 976x103 células/mL e nos casos de coliformes 1161x103 células/mL. Os estafilococos revelaram grande sensibilidade (>95%) à cefalotina, cotrimoxazol, enrofloxacina e gentamicina, com resistência de 41,2% à penicilina e 11,8% à oxacilina. Tanto estafilococos coagulase positivos (ECP) como negativos (ECN) revelaram genes codificadores de enterotoxinas em 21,6% do primeiro grupo e 41,9% no segundo. O gene sea foi o mais detectado 45,8% (n=24), seguido pelo seb com 29,2% e sec com 25,0%. O gene codificador da sed não foi identificado. Frente aos resultados, destaca-se o risco potencial à saúde pública pela possibilidade de veiculação de linhagens de Staphylococcus spp. carreadores de genes produtores de enterotoxinas, podendo ocasionar toxi-infecções alimentares.(AU)

Enterotoxin-encoding genes in Staphylococcus aureus from buffalo milk / Genes codificadores de enterotoxinas em Staphylococcus aureus no leite de búfalas

This paper investigated the occurrence of Staphylococcus aureus and the detection of enterotoxin-encoding genes of these strains in milk collected from 30 Murrah buffaloes used to produce dairy products in Brazil. A total of 68 strains of Staphylococcus aureus were found as identified by conventional laboratory tests, and thus screened for sea, seb, sec, sed, see, seg, seh and sei enterotoxin-encoding genes by polymerase chain reaction (PCR). Twelve strains containing enterotoxin-amplified genes were found, with higher expression for the sei and seh genes. These results can be attributed to animal health and inadequate cleaning of the equipment, indicating the need for better quality control in animal production and health lines. The results of this study with the presence of pathogens and their enterotoxigenic potential indicate a source of food poisoning, as well as being a pioneering study in the detection of new enterotoxins for buffalo milk.(AU)

Este estudo investigou a ocorrência de isolados de Staphylococcus aureus e a detecção de genes que codificam a enterotoxigenicidade dessas cepas em leite de búfala utilizado na produção de laticínios no Brasil. As amostras foram coletados em 30 búfalos da raça Murrah, identificado por testes laboratoriais convencionais, foram identificados um total de 68 cepas de S. aureus e rastreados para os genes que codificam a enterotoxina sea, seb, sec, sed, see, seg, seh and sei por reação em cadeia da polimerase (PCR). Doze cepas contendo genes da enterotoxina foram amplificadas, com maior expressão para os genes sei e seh. Esses resultados podem ser atribuídos à saúde animal e à higiene inadequada do equipamento, indicando a necessidade de melhor controle de qualidade nas linhas de produção e saúde animal. Os resultados desta pesquisa, com a presença de patógenos e seu potencial enterotoxigênico, indicam uma fonte de intoxicação alimentar, além de ser uma pesquisa pioneira na detecção de novas enterotoxinas para o leite de búfala.(AU)

Detecção de Listeria spp de importância em saúde pública em diferentes pontos da obtenção do leite e da elaboração de queijos tipo Minas Frescal / Detection of Listeria spp important in public health from different points of milk obtaining and elaboration of Minas Frescal cheese

Queijos tipo Minas frescal podem veicular microrganismos patogênicos. Este estudo objetivou isolar Listeria spp. e identificar as espécies L. innocua, L. seeligeri, L. ivanovii e L. monocytogenes na obtenção do leite e na elaboração de queijos tipo Minas frescal e detectar a presença de genes de virulência. Foram realizadas coletas em cinco pequenas propriedades rurais produtoras deste tipo de queijo em Jaboticabal-São Paulo. Foram coletadas amostras de suabes de fezes bovinas, amostras de mãos de ordenhador, balde de ordenha, leite, água, superfície de elaboração de queijos, mãos de manipulador do queijo, peneiras, bandejas, fôrmas e escumadeiras. O gênero Listeria spp. teve alta prevalência nas amostras, entretanto, nenhuma das espécies pesquisadas foi identificada. Assim, conclui-se que a presença de Listeria spp. em alta percentagem representa potencial risco de contaminação de Queijos tipo Minas frescal e exige uma vigilância contínua para a presença deste gênero.

[Food poisoning outbreak in a kindergarten in the Province of Buenos Aires, Argentina]. / Brote de intoxicación alimentaria en un jardín de infantes de la provincia de Buenos Aires.

On November 27, 2008, a foodborne disease outbreak associated with the consumption of chicken salad occurred in a kindergarten in the District of Hurlingham, Province of Buenos Aires. Thirty-seven children and 10 adults with gastrointestinal symptoms were affected. Five children were hospitalized with signs of dehydration, one of them requiring intensive care. Staphylococcus aureus subsp. aureus was isolated from the mentioned food in 4 out of 5 stool specimens from the patients, and in 3 out of 5 food handlers (nose of food handler #1, hands of food handlers #2 and 3). The isolates carried the genes coding for enterotoxins SEA and SED. The macrorestriction patterns showed 100% similarity by pulsed-field gel electrophoresis using the SmaI enzyme. A timely outbreak investigation allowed us to identify the causative agent of the food poisoning as well as the failures in food processing and to implement corrective measures.

Detección y expresión de superantígenos y de resistencia antimicrobiana en aislamientos obtenidos de mujeres portadoras de Staphylococcus aureus que cuidan y alimentan niños.

Introducción. Staphylococcus aureus coloniza mucosas y piel, y causa graves infecciones en el hombre y los animales. Es importante establecer el estatus de portadoras de cepas enterotoxigénicas de este microorganismo en manipuladoras de alimentos, con el fin de prevenir intoxicaciones alimentarias.Objetivo. Establecer las correlaciones entre los genes de enterotoxinas clásicas, el gen tsst-1, la producción de toxinas en cultivo y la resistencia antimicrobiana en aislamientos de S. aureus provenientes de manipuladoras de alimentos que cuidan niños en sus comunidades.Materiales y métodos. Se cultivaron muestras de las fosas nasales y las yemas de los dedos de las manos, y se identificó S. aureus empleando las pruebas de rutina y métodos automatizados. La extracción de ADN se hizo mediante el método de bromuro de cetil-trimetil-amonio (Cetyl-Trimethyl-Ammonium Bromide, CTAB) modificado. Para la detección de superantígenos se emplearon pruebas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) simple y múltiple, y para la de toxinas, estuches comerciales.Resultados. Se encontró que el 22,0 % de los aislamientos correspondía a portadoras de S. aureus: 17,0 % en los aislamientos de fosas nasales; 5,0 % en los de las manos y 6,7 % simultáneamente en los dos sitios. La prevalencia de superantígenos fue de 73,7 %. El genotipo más frecuente fue el seatsst-1, con 10,0 %. La resistencia a un solo antibiótico fue de 74,7 % y, a cuatro antibióticos, de 3,2 %; de los aislamientos, el 93,7 % correspondía a cepas productoras de betalactamasas. La detección de genes clásicos y de tsst-1 mediante PCR fue de 48,4 % y la de toxinas en el sobrenadante, de 42,1 %,con una correlación de 95,7 %. Las mayores correlaciones se establecieron entre las toxinas TSST-1 (22/22) y SEA (17/18). La correlación del gen tsst-1 con la proteína y la resistencia fue de 100 %. Todos los aislamientos con el genotipo sea-tsst-1 t fueron resistentes y productores de las toxinas.Conclusión. La tasa de aislamientos de S. aureus toxigénicos y resistentes obtenidos de mujeres que cuidan y preparan alimentos para niños fue de más de 70 %, lo que demostró su gran virulencia y la consecuente necesidad de aplicar estrictamente las normas higiénicas y sanitarias vigentes para evitar el riesgo de intoxicación alimentaria.

Relationship between virulence factor genes in coagulase-negative Staphylococcus spp. and failure of antimicrobial treatment of subclinical mastitis in sheep / Relação entre genes de fatores de virulência em Staphylococcus spp. coagulase-negativos e a falha do tratamento antimicrobiano da mastite subclínica ovina

Coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) are the main microorganisms involved in ovine mastitis. Treatment at the end of lactation can contribute towards cure and prevention of subclinical cases during the subsequent lactation. However, virulence factors and resistance mechanisms presented by CNS can decrease cure rates. The aims of the study were to identify the species of CNS in milk of mastitic ewes with and without antimicrobial treatment, and to investigate the presence of genes relating to resistance of β-lactam antimicrobials, formation of biofilms, production of enterotoxins and production of the toxic shock syndrome toxin. Cases of failure in the treatment were related with the presence/absence of the respective genes. Sixty sheep were divided into three groups: G1, without treatment; G2, animals treated via the intramammary route with 100mg of cloxacillin during drying off; and G3, sheep treated via the intramammary route with 50 mg of nanoparticulate cloxacillin. Milk samples were gathered during drying off and 15 and 30 days after the parturition of the subsequent lactation. The analyses to identify the species of CNS were carried out by means of the internal transcribe spacer technique and the investigation of the genes responsible for the virulence factors and resistance to oxacillin was performed using the polymerase chain reaction (PCR) technique. No sample was positive for the mecA gene. The only gene relating to production of enterotoxins was sec. Among the genes relating to production of biofilm, icaD was the only one identified in the three experimental groups. Staphylococcus warneri was the main species of CNS isolated during the pre and post-partum periods of the sheep. The species carrying genes relating to production of enterotoxins and biofilms were present in uncured sheep.(AU)

Staphylococus spp. coagulase-negativos (SCN) estão entre os principais micro-organismos envolvidos na mastite ovina. O tratamento ao final da lactação pode contribuir com a cura e a prevenção de casos subclínicos durante a lactação seguinte. Todavia, fatores de virulência e mecanismos de resistência apresentados por SCN podem reduzir as taxas de cura. Os objetivos desse estudo foram identificar as espécies de SCN no leite de ovelhas com mastite com e sem tratamento antimicrobiano e investigar a presença de genes relacionados com resistência a antibióticos beta lactâmicos, formação de biofilmes, produção de enterotoxinas e produção da toxina da síndrome do choque tóxico. Casos de falhas no tratamento foram relacionados com a presença/ausência dos respectivos genes. Sessenta ovelhas foram divididas em três grupos: G1, sem tratamento; G2, animais tratados via intramamária com 100mg de cloxacilina antes da secagem; e G3, ovelhas tratadas via intramamária com 50 mg de cloxacilina nanoparticulada. Amostras de leite foram obtidas durante a secagem e 15 e 30 dias depois do parto na lactação seguinte. As análises para identificar as espécies de SCN foram conduzidas por meio da técnica de Internal transcribe spacer e a investigação dos genes responsáveis pelos fatores de virulência e resistência à oxacilina foi realizada usando a técnica reação em cadeia da polimerase. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. O único gene relacionado com a produção de enterotoxinas foi o sec. Dentre os genes relacionados com a produção de biofilme, icaD foi o único identificado nos três grupos experimentais. Staphylococcus warneri foi a principal espécie de SCN isolada durante o pré e pós-parto. As espécies que apresentaram genes relacionados com a produção de enterotoxinas e biofilmes estavam presentes nas ovelhas não curadas.(AU)

Detección y expresión de superantígenos y de resistencia antimicrobiana en aislamientos obtenidos de mujeres portadoras de Staphylococcus aureus que cuidan y alimentan niños / Detection and expression of superantigens and resistance in isolates from women carriers of Staphylococcus aureus who take care of and feed children

Resumen Introducción. Staphylococcus aureus coloniza mucosas y piel, y causa graves infecciones en el hombre y los animales. Es importante establecer el estatus de portadoras de cepas enterotoxigénicas de este microorganismo en manipuladoras de alimentos, con el fin de prevenir intoxicaciones alimentarias. Objetivo. Establecer las correlaciones entre los genes de enterotoxinas clásicas, el gen tsst-1, la producción de toxinas en cultivo y la resistencia antimicrobiana en aislamientos de S. aureus provenientes de manipuladoras de alimentos que cuidan niños en sus comunidades. Materiales y métodos. Se cultivaron muestras de las fosas nasales y las yemas de los dedos de las manos, y se identificó S. aureus empleando las pruebas de rutina y métodos automatizados. La extracción de ADN se hizo mediante el método de bromuro de cetil-trimetil-amonio (Cetyl-Trimethyl- Ammonium Bromide, CTAB) modificado. Para la detección de superantígenos se emplearon pruebas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) simple y múltiple, y para la de toxinas, estuches comerciales. Resultados. Se encontró que el 22,0 % de los aislamientos correspondía a portadoras de S. aureus: 17,0 % en los aislamientos de fosas nasales; 5,0 % en los de las manos y 6,7 % simultáneamente en los dos sitios. La prevalencia de superantígenos fue de 73,7 %. El genotipo más frecuente fue el sea-tsst-1, con 10,0 %. La resistencia a un solo antibiótico fue de 74,7 % y, a cuatro antibióticos, de 3,2 %; de los aislamientos, el 93,7 % correspondía a cepas productoras de betalactamasas. La detección de genes clásicos y de tsst-1 mediante PCR fue de 48,4 % y la de toxinas en el sobrenadante, de 42,1 %, con una correlación de 95,7 %. Las mayores correlaciones se establecieron entre las toxinas TSST-1 (22/22) y SEA (17/18). La correlación del gen tsst-1 con la proteína y la resistencia fue de 100 %. Todos los aislamientos con el genotipo sea-tsst-1 t fueron resistentes y productores de las toxinas. Conclusión. La tasa de aislamientos de S. aureus toxigénicos y resistentes obtenidos de mujeres que cuidan y preparan alimentos para niños fue de más de 70 %, lo que demostró su gran virulencia y la consecuente necesidad de aplicar estrictamente las normas higiénicas y sanitarias vigentes para evitar el riesgo de intoxicación alimentaria.

Abstract Introduction: Staphylococcus aureus colonizes mucous membranes and skin causing severe infections in humans and animals. It is important to determine carrier status of enterotoxigenic strains of this microorganism in food handlers to prevent food poisoning. Objective: To establish the correlations among classic enterotoxigenic genes, tsst-1 gene, the production of toxins in cultures and antimicrobial resistance in S. aureus isolates from women who handle the food, feed and take care of children in their communities. Materials and methods: Nasal swab and finger samples were cultured and S. aureus was identified using routine methods and automated systems. DNA extraction was done by the CTAB modified method, and superantigen detection by simple and multiplex PCR, while toxins were detected using commercial kits. Results: We found that 22.0% of subjects were S. aureus carriers: 17.0% corresponded to nose samples, 5.0% to hands and 6.7% to both nose and hands. The prevalence of superantigens was 73.7%. The most frequent genotype was sea-tsst-1 with 10%. Resistance to one antibiotic was 74.7%, and to four antibiotics, 3.2%; 93.7% of the isolates were betalactamase-positive. Classical genes and tsst-1 gene were detected by PCR in 48.4% of samples and toxins in supernatant were detected in 42.1% of them with 95.7% of correlation.The highest correlations were established for TSST-1 and SEA with 100% and 94.4%, respectively. The correlation of tsst-1 gene with toxin production and resistance was 100%. All isolates with genotype sea-tsst-1 were toxin-positive and resistant. Conclusion: The rate of toxigenic and resistant S. aureus isolates from women in charge of feeding and taking care of children was higher than 70%, which demonstrates its high virulence. This requires the strict application of hygienic and sanitary regulations in order to avoid the risk of food poisoning.

Detecção de genes de enterotoxinas em staphylococcus aureus isolados de leite cru de búfala / Detection of enterotoxin genes in staphylococcus aureus isolated from raw buffalo milk

Atualmente, a principal causa de intoxicação alimentar está associada ao consumo de alimentos contendo enterotoxinas produzidas, principalmente, pela espécie Staphylococcus aureus. Vários estudos descrevem a prevalência de S. aureus e suas enterotoxinas no leite bovino. Entretanto, essas informações em leite bubalino ainda são escassas. O crescente consumo de derivados de leite bubalino alerta para a questão de saúde pública, visto que essas enterotoxinas são resistentes aos processos térmicos pelos quais é submetida a sua matéria-prima. O objetivo deste estudo foi analisar a presença de genes que codificam enterotoxinas estafilocócicas em isolados de S. aureus obtidos de leite cru de búfala. (AU)

Bacillus cereus as the main casual agent of foodborne outbreaks in Southern Brazil: data from 11 years / Bacillus cereus como principal agente etiológico em surtos de intoxicação alimentar no Sul do Brasil: dados de 11 anos / Bacillus cereus como el principal agente causante de brotes de enfermedades alimentarias en el Sur de Brasil: datos de 11 años

Foodborne diseases are a global concern. In Brazil, the most prevalent pathogen found in foodborne outbreaks is Salmonella sp. (14.4%), followed by Staphylococcus aureus (7.7%), Escherichia coli (6.5%), and Bacillus cereus (3.1%). With the aim to perform a regional detailed analysis of foodborne intoxication, we analyzed 253 outbreaks' profile reports to Food Surveillance team of the General Secretariat of Health Surveillance of Porto Alegre, Rio Grande do Sul State, between 2003 and 2013. In contrast to what was most notified in Brazil, in Porto Alegre the main outbreak agent identified was Bacillus cereus (32.2%) and, based on the patient symptoms, most cases were linked to enterotoxin production. The majority of the outbreaks were linked to the ingestion of food containing cereals or sauces poorly kept at environment temperature during the stock or preparation. We believe that, due to the compulsory use of pasteurized eggs in our city, Salmonella sp. outbreaks are less important here.

As doenças de veiculação alimentar representam um problema de ordem global. No Brasil, o patógeno mais prevalente em surtos de intoxicação alimentar é a Salmonella sp. (14,4%), seguido pelo Staphylococcus aureus (7,7%), Escherichia coli (6,5%) e Bacillus cereus (3,1%). Com o objetivo de realizar uma análise regional detalhada da intoxicação alimentar, examinamos os relatórios de 253 surtos, notificados à equipe de Vigilância de Alimentos da Coordenadoria Geral de Vigilância em Saúde de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, entre 2003 e 2013. Ao contrário do que é notificado no Brasil, em Porto Alegre, identificamos como principal agente etiológico, o Bacillus cereus (32,2%) e de acordo com os sintomas dos pacientes, a maioria dos casos esteve associada à produção de enterotoxina. A maioria dos surtos foram associados à ingestão de alimentos que continham cereais ou molhos mantidos à temperatura ambiente durante o armazenamento ou preparação. O uso compulsório de ovos pasteurizados em Porto Alegre pode explicar a relativa escassez de surtos de Salmonella sp. no município.

Las enfermedades transmitidas a través de la comida son una preocupación de carácter global. En Brasil, el patógeno encontrado de forma más prevalente en los brotes de epidemias alimentarias es la Salmonella sp. (14,4%), seguida por el Staphylococcus aureus (7,7%), Escherichia coli (6,5%), y el Bacillus cereus (3,1%). Con el fin de realizar un análisis regional detallado de los brotes de infecciones alimentarias, analizamos el perfil de 253 brotes, registrados por el servicio de Vigilancia Alimentaria de la Secretaría General de Vigilancia en Salud de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, entre 2003 y 2013. En contraste con lo que fue más notificado en Brasil, en Porto Alegre el principal agente causante de brotes fue identificado como el Bacillus cereus (32.2%) y, basado en los síntomas del paciente, la mayoría de los casos estaban relacionados con la producción de la enterotoxina. Muchos de los brotes estaban relacionados con la ingesta de comida que contenía cereales o salsas mal conservadas a temperatura ambiente durante el almacenaje o la preparación. Creemos que, debido a la utilización obligatoria de huevos pasteurizados en nuestra ciudad, los brotes de Salmonella sp. son menos relevantes aquí.

Genes codificadores para enterotoxinas de aislamientos de estafilococos coagulasa negativos y coagulasa positivos a partir de muestras de mastitis bovina / Coding genes for enterotoxins of isolated coagulase-negative and coagulase-positive staphylococci from bovine mastitis samples / Genes codificadores de enterotoxinas em isolados de estafilococos coagulase positivo em amostras com mastite bovina

Introducción. La mastitis bovina es la inflamación de glándulas mamarias y tejidos secretores. El género Staphylococcus es el agente causal más importante, por su capacidad de producir diferentes factores de virulencia. Las enterotoxinas estafilocócicas son un grupo importante de toxinas que permiten al microorganismo invadir células y tejido huésped, son diseminadas por medio de productos alimenticios y son responsables de graves intoxicaciones alimentarias en el mundo. Objetivo. Determinar la presencia de genes codificadores para las enterotoxinas estafilocócicas (Staphylococcal Enterotoxins, SE) SEA, SEB, SEC, SED y SEE, en cepas de Staphylococcus spp. asociadas con mastitis bovina. Materiales y métodos. Se trata de un estudio cuantitativo, descriptivo y transversal. Se identificaron especies por medio de la amplificación de la región r16S. Los genes SEA, SEE, SEC, SED y SEE se detectaron mediante la amplificación por PCR convencional, usando iniciadores específicos para cada gen, y se evidenciaron los amplicones con electroforesis. Resultados. Hubo predominio del grupo Staphylococcus coagulasa positivo (65,2 %) sobre el grupo coagulasa negativo (37,5 %). Staphylococcus aureus fue la cepa más frecuente (88,5 %). El gen SEA (1,7 %) se detectó en S. sciuri, el gen SEB (3,6 %), en S. pasteuri y S. warneri, y el gen SEC (3,6 %), en S. sciuri y S. saprophyticus SEC. No se detectaron los genes SED y SEE en ninguna de las cepas evaluadas Conclusiones. Los resultados apoyan que la mastitis bovina también es causada por Staphylococcus coagulasa negativo, lo cual indica la posibilidad de que este grupo adquiera atributos genéticos, como enterotoxinas y factores de virulencia, por transferencia horizontal.

Introduction: Bovine mastitis is an inflammation of mammary glands and secretory tissues. Staphylococcus gender is the main causal agent, due to its capacity to produce different virulence factors. Staphylococcal enterotoxins are a main group of toxins which permit the microorganism to spread in cells and guest tissue, which are disseminated through food products, being responsible of serious food poisoning cases around the world. Objective: To determine the presence of coding genes for staphylococcal enterotoxins (SE); SEA, SEB, SEC, SED and SEE, in Staphylococcus spp. strains related to bovine mastitis. Materials and methods: Quantitative study, descriptive and cross-sectional. It was made an identification of species through. They were identified 57 Staphylococcus spp. strains at specie level by amplification of r16S region. The detection of SEA, SEE, SEC, SED, y SEE genes was made through conventional PCR, using specific primers for each gene, they were evinced amplicons through electrophoresis. Results: It was evinced predominance of coagulase-positive Staphylococcus group (65.2%), being Staphylococcus aureus the strain with the highest presence (88.5%), whereas coagulase-negative Staphylococcus group was 37.5%. SEA gene was detected in S. sciuri (1.7%); SEB in S. pasteuri and S. warneri (3.6%); SEC was identified in S. sciuri and S. saprophyticus (3.6%); they were not detected SED y SEE genes in any of the researched strains. Conclusions: The results support that the development of bovine mastitis is also caused by coagulase-negative Staphylococcus, indicating the possibility that this group acquires genetic attributes as enterotoxins and virulence factors by horizontal gene transfer.

Introdução. A mastite bovina é a inflamação das glândulas mamárias e dos tecidos secretórios. O gênero Staphylococcus é o agente causador mais importante, devido à sua capacidade de produzir diferentes fatores de virulência. As enterotoxinas estafilocócicas são um importante grupo de toxinas que permitem que o microorganismo invada as células e tecidos do hospede, são disseminadas através de produtos alimentícios e são responsáveis por intoxicações alimentares graves no mundo. Objetivo. Determinar a presença de genes que codificam enterotoxinas estafilocócicas (Staphylococcal Enterotoxins, SE) SEA, SEB, SEC, SED e SEE, em cepas de Staphylococcus spp. associada à mastite bovina. Materiais e métodos. Estudo quantitativo, descritivo e transversal. As espécies foram identificadas por amplificação da região r16S. Os genes SEA, SEE, SEC e SED foram detectados por amplificação PCR convencional utilizando primers específicos para cada gene, e os amplicons foram evidenciados com eletroforese. Resultados. Houve predomínio do grupo Staphylococcus coagulase positivo (65,2%) sobre o grupo negativo da coagulase (37,5%). Staphylococcus aureus foi a cepa mais frequente (88,5%). O gene SEA (1.7%) foi detectado em S. sciuri, o gene SEB (3.6%) em S. pasteuri e S. warneri, SEC (3.6%) em S. sciuri e SEC em S. saprophyticus. Os genes SED e SEE não foram detectados em nenhuma das cepas avaliadas. Conclusões. Os resultados confirmam que a mastite bovina também é causada por Staphylococcus coagulase-negativo, o que indica a possibilidade de que este grupo adquira atributos genéticos, como enterotoxinas e fatores de virulência, por transferência horizontal.

Bacillus cereus un patógeno importante en el control microbiológico de los alimentos: um patógeno importante no controle microbiológico dos alimentos / Bacillus cereus an important pathogen the microbiological control of food / Bacillus cereus

Bacillus cereus es una bacteria genéticamente diversa que se encuentra comúnmente en el ambiente. Contamina los alimentos afectando la salud humana, al ingerir el microorganismo y/o sus toxinas, la emética o las enterotoxinas. En Colombia son escasos los reportes de intoxicación por B. cereus y se estima que hay un gran subregistro. Por lo anterior, se recomienda aumentar la vigilancia de este patógeno y realizar estudios sobre aspectos relevantes que permitan aplicar medidas de control para disminuir las intoxicaciones por B. cereus. El objetivo de esta revisión bibliográfica es presentar información actualizada sobre B. cereus, que incluye aspectos de su biología, taxonomía, toxinas, alimentos que contamina y metodologías para detectar, prevenir y controlar este microorganismo. La información presentada es de utilidad para el público en general, especialmente personas vinculadas al sector de alimentos, inocuidad alimentaria y control de procesos.

Bacillus cereus is a genetically diverse bacterium commonly found in the environment. It contaminates food, thus affecting human health upon ingestion of the microorganism and/or its toxins, the emetic or enterotoxins. In Colombia, reports of intoxication by B. cereus are scarce and under-registration is presumed. Because of this, it is recommended to increase surveillance of this pathogen and to develop studies on relevant aspects that allow the application of control measures to reduce intoxications by B. cereus. The aim of this review is to present current information on B. cereus, including aspects of its biology, taxonomy, toxins, food that it contaminates and methodologies for the detection, prevention and control of this microorganism. This information is useful for the general public, especially people involved with the food sector, food safety and process control.

Bacillus cereus é uma bactéria geneticamente diversa normalmente encontrada no ambiente. Contamina os alimentos dos humanos e estes acabam prejudicados quando ingerem o microorganismo e/ou suas toxinas, a emética ou as enterotoxinas. Na Colômbia existem poucos relatórios de intoxicação por B. cereus, mas se estima um grande sub-registro. Essa estimação faz com que seja recomendável aumentar a vigilância deste patógeno e estudar aspetos relevantes que permitam aplicar medidas de controle, para diminuir as intoxicações por B. cereus. O objetivo desta revisão bibliográfica é apresentar informação atualizada sobre a B. cereus, incluindo aspectos da sua biologia, taxonomia, toxinas, alimentos que pode contaminar e metodologias para detectar, prevenir e controlar este microorganismo. Esta informação é útil para o público geral, especialmente para pessoas ligadas ao setor dos alimentos, à segurança alimentar e ao controle de processos

Detection of Bacillus cereus isolated during ultra high temperature milk production flowchart through random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction / Detecção de Bacillus cereus isolado durante o fluxograma de produção do leite tratado por ultra alta temperatura através do DNA polimórfico amplificado ao acaso através da reação em cadeia pela polimerase

ABSTRACT: The present study focused on isolation Bacillus cereus during the UHT milk production and shelf life, to assess the enterotoxigenic production capacity of isolates and to evaluate the use of the RAPD-PCR technique to verify whether Bacillus cereus isolated at different phases of UHT milk processing belongs to the same strain. For this, six groups of milk samples composed of raw, pasteurized and UHT milk were collected from a processing plant. The results revealed that bacteria belonging to the Bacillus cereus group were isolated from 51.6%, 81.6% and from 13.8% of raw, pasteurized and UHT milk samples, respectively. About 50.0% of isolates from raw milk, 19.2% isolates from pasteurized milk and 70.7% isolates from UHT milk were capable of producing enterotoxins. It was confirmed the genetic similarity among Bacillus cereus isolates from raw, pasteurized and UHT milk, therefore demonstrating that the microorganism is able to withstand UHT treatment. These results should serve as a warning to health authorities, given that 13.8% of samples were not in accordance with standards established by the Department of Health for containing a potentially pathogen agent, therefore indicating that contamination of milk by sporulating bacteria should be avoided.

RESUMO: Objetivou-se realizar o isolamento de bactérias do grupo do Bacillus cereus e verificação da semelhança genética entre elas, através da PCR-RAPD, durante a produção e vida de prateleira do leite UAT, bem como verificar sua capacidade enterotoxigência. Para isso, foram colhidas em uma usina de beneficiamento seis grupos de amostras de leite compostos cada um por amostras de leite cru, pasteurizado e UAT. Os resultados obtidos evidenciaram que bactérias do grupo do Bacillus cereus foram isoladas de 51,6% das amostras de leite cru, de 81,6% das de leite pasteurizado e de 13,8% das de leite UAT. Demonstraram-se capazes de produzir enterotoxinas 50,0% dos isolados de leite cru, 19,2% de leite pasteurizado e 70,7% de leite UAT. Também se pode constatar a semelhança genética entre as cepas de Bacillus cereus isoladas do leite cru, pasteurizado e UAT, evidenciando assim que o micro-organismo é capaz de resistir ao tratamento por UAT. Tais resultados devem servir de alerta às autoridades sanitárias, tendo em vista que 13,8% deles estavam em desacordo com o estabelecido pelo Ministério da Saúde, por serem capazes de veicular um agente potencialmente patogênico, demonstrando assim que a contaminação do leite por bactérias esporuladas deve ser motivo de preocupação.

Correlación entre la detección de superantígenos y resistencia a oxacilina en aislamientos hospitalarios de Staphylococcus aureus / Correlation between detection of superantigens and oxacillin resistance of Staphylococcus aureus in hospital isolates

Objetivo: Establecer la correlacion entre la deteccion de superantigenos (MSSA) y la susceptibilidad a oxacilina de Staphylococcus aureus (MRSA) en aislamientos hospitalarios. Materiales y métodos: En 81 aislamientos de Staphylococcus aureus de origen hospitalario, la susceptibilidad a oxacilina se establecio por un sistema automatizado y la deteccion de 22 genes de superantigenos fue realizada mediante PCR individual y multiple. Resultados: La MRSA fue del 38,3%. Todos los aislamientos MRSA portaban uno o mas genes de superantigenos; y el 92% de MSSA. El numero de genotipos fue variable, pero un hallazgo relevante fue que el cluster egc solo fue detectado en MRSA (48,4%). Los genes no clasicos mas detectados en MRSA fueron sem (53,1%) y seg (28,4%); y sem (37%) y seq (30,9%) para MSSA. El gen sec clasico (13,6%) fue mas prevalente en MSSA, y en MRSA, los clasicos fueron de muy baja frecuencia. Para todos los genes, los genes seg , sej , sen , seo y seq mostraron diferencias estadisticamente significativas entre los aislamientos MRSA y MSSA. Conclusión: Este estudio no permitio sacar conclusiones concluyentes para establecer la relacion entre la deteccion de superantigenos y la susceptibilidad a oxacilina (MRSA vs. MSSA). Aunque, el numero de genotipos fue variable, la presencia del cluster egc solamente en aislamientos MRSA es un hallazgo interesante, y en posteriores estudios se podria determinar la importancia del cluster egc.

Objective: To establish the relationship between the detection of superantigens (MSSA) and Staphylococcus aureus resistance to oxacillin in hospital isolates. Material and methods: In 81 isolates of Staphylococcus aureus of hospital origin, an oxacillin susceptibility test was performed by an automated system and 22 superantigenic genes were obtained using single and multiplex PCR. Results: The MRSA was 38.3%. All MRSA isolates carried one or more genes for superantigens and 92.0% of MSSA. The numbers of genotypes for the 2 groups were variable, but the most important finding was that the egc cluster was detected only in MRSA (48.4%). The non-classic genes more often detected in MRSA were sem (53.1%) and seg (28.4%); in MSSA they were sem (37.0%) and seq (30.9%). The gen classic sec (13.6%) was more prevalent in MSSA and in MRSA; the classic genes were very low in frequency. For all genes, the genes: seg , sej , sen , seo and seq showed statistically significant differences between MRSA and MSSA isolates. Conclusion: This study did not reveal a clear relationship between the detection of superantigens and oxacillin susceptibility (MRSA vs. MSSA). Although the number of genotypes varied, the presence of egc cluster only in the MRSA isolate was an important finding. Further studies are needed to establish the importance of the egc cluster.

Enterotoxigenic Genes in strains of Staphylococcus spp., isolated from cheese made in Pamplona-Colombia / Genes enterotoxigénicos en cepas de Staphylococcus spp., aisladas a partir de queso elaborado en Pamplona-Colombia

Objective. To determine the incidence of coagulase-positive strains of enterotoxigenic Staphylococcus in doble crema (double cream) cheese samples produced in Pamplona. Materials and methods. Bacterial isolation was performed following the routine method for coagulase positive Staphylococcus provided by the Colombian Technical Standard 4779, by using Baird Parker medium with confirmation of typical colonies by performing the coagulase test. Detection of genes for principal enterotoxins was done by PCR. Results. The prevalence of coagulase positive Staphylococcus in cheese samples was 31%, with 27% of the samples failing to meet the requirements of the NTC 750. In 24.6% of the studied isolates, genes for enterotoxin production were detected. The presence, in the isolated strains, of genes for SEB, SEA and SED was 18.5%, 4.6% and 3.0%, respectively. Conclusions. The significant presence of enterotoxigenic genes found in the isolates obtained from samples of double cream cheese made in Pamplona, suggests an important hazard to the health of consumers.

Objetivo. Determinar la incidencia de cepas de Staphylococcus coagulasa positivas, potencialmente enterotoxigénicas, en muestras de queso doble crema elaborado en Pamplona. Materiales y métodos. Se siguió el método tradicional de aislamiento de Staphylococcus coagulasa positivos estipulado por la Norma Técnica Colombiana 4779, empleando el medio de Baird Parker con confirmación de las colonias típicas mediante la realización de la prueba de la coagulasa. La detección de los genes para las principales enterotoxinas se realizó utilizando la técnica de PCR. Resultados. Se encontró una prevalencia de Staphylococcus coagulasa positivos en el 31% de las muestras; el 27% de las muestras incumplieron la NTC 750. En el 24.6% de las cepas estudiadas se detectaron genes para producción de enterotoxinas. La presencia, en las cepas aisladas, de genes para ESB, ESA y ESD fue de 18.5%, 4.6%, y 3.0%, respectivamente. Conclusiones. La significativa presencia de genes enterotoxigénicos encontrada en las cepas obtenidas a partir de las muestras de queso doble crema elaborado en Pamplona, sugiere un importante peligro para la salud de los consumidores.

Producción de Enterotoxina y Biofilm en Aislamientos Clínicos de Staphylococcus aureus Resistente a Meticilina / Enterotoxin and Biofilm Production in Clinical Isolates of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus

S. aureus se ha convertido en un problema de salud pública, debido a la dificultad que representa el tratamiento de las infecciones causadas por SARM. El propósito de esta investigación fue determinar la producción de enterotoxinas A, B, C y D y la producción de biofilm en aislamientos de SARM. Se estudiaron 50 cepas aisladas de diferentes tipos de muestras clínicas. La detección de enterotoxinas se realizó por la técnica de aglutinación en fase reversa y la producción de biofilm mediante: agar rojo congo y el método en microplacas de cultivos celulares. La producción de enterotoxina se observó en 9 cepas (18%), siendo la enterotoxina D (64%) la más prevalente, seguida de la B (27%) y la A (9%). Se demostró una asociación significativa entre la producción de enterotoxina y el tipo de muestra de la que provenía la cepa. La producción de biofilm se constató en 30% y 98% de las cepas por los métodos de agar rojo congo y microplacas de cultivos celulares, respectivamente; sólo en 15 cepas (30%) se observó correlación de ambos ensayos, se demostró que el método en microplacas de cultivo celular es más eficaz para detectar la producción de biofilm en S. aureus.

S. aureus has become a public health problem, due to the difficulty of treating infections caused by methicillin-resistant S. aureus (MRSA). The purpose of this research was to determine the production of enterotoxins A, B, C and D and the production of biofilm in clinical isolates of MRSA. Fifty MRSA strains isolated from different types of clinical samples were studied. Detection of enterotoxins was carried out using the technique of reversed phase agglutination, while biofilm production was studied through two tests: Congo red agar and the microplate cell culture method. Enterotoxin production was observed in 9 strains (18%); enterotoxin D (64%) was the most prevalent, followed by B (27%) and A (9%). A significant association was shown between enterotoxin production capacity and the type of sample that came from the strain. Biofilm production was found in 30% and 98% of the strains using the Congo red Agar and microplate cell culture methods, respectively. A correlation of both trials was observed in only 15 strains (30%). It was shown that the microplate cell culture method is more effective for detecting biofilm production in S. aureus strains.